一、发现和命名

本中心与国家人类基因组北方研究中心合作通过生物信息学分析克隆了人类功能未知基因 CCDC134 （ coiled-coil domain containing 134 又名 FLJ22349 ），并构建真核表达质粒，经过高通量筛选， CCDC134 过表达可以在 HEK293T 细胞中明显抑制乙酸肉豆蔻佛波醇 (PMA) 和离子霉素 (ionomyein) 刺激的 Elk1 通路 [1] 。

二、结构和表达谱

人 CCDC134 基因定位于 22q13.2 ，包含 7 个外显子和 6 个内含子，剪切符合 GT-AG 规律， cDNA 序列由 1280 个脱氧核苷酸组成，从 105-794 有一个编码 229 个氨基酸的开放读码框架，编码 229 个氨基酸， 与已知的人类基因没有同源性 。生物信息学分析 CCDC134 具有一个 coiled-coil 区域，其 N 端有一段 23 个氨基酸编码的信号肽。经 N 端测序证实此蛋白是从 N 端第 23 位 AA 进行切割，且分泌至上清蛋白具有糖基化修饰。

Northern blot 检测在正常睾丸高表达，而正常心、肺和胎盘组织低表达或无表达， RT-PCR 结果显示正常组织和肿瘤组织表达有一定差异，在肿瘤组织中表达高于正常组织，各种细胞系中广泛表达。尤其在外周血淋巴细胞 NS128 高表达，且 CD8 ＋ T 细胞活化后 NS128 表达上调，而 B 细胞 CD19 活化后下调。组织芯片免疫组化结果显示 CCDC134 在多种正常组织、肿瘤组织中都有表达，以上结果提示 CCDC134 是一个表达较为广泛的基因。

三、功能

利用真核表达质粒转染进行高通量荧光素酶报告基因表达筛选技术，发现 CCDC134 过表达可以在 HEK293T 细胞中明显抑制乙酸肉豆蔻佛波醇 (PMA) 和离子霉素 (ionomyein) 刺激的 Elk1 通路，并且能影响 ERK 和 JNK/SAPK 信号通路，即抑制 MEK1/2 、 ERK1/2 、 Elk1 和 JNK 的磷酸化水平，但并不影响 p38 MAPK 的磷酸化水平，对细胞周期也有一定的影响。

进而，设计并化学合成 3 对针对 CCDC134 基因的 siRNA ，经 RT-PCR 检验获得了一对抑制效果很好的 siCCDC134 。使用 siCCDC134 转染 HEK293T 和 HeLa 细胞封闭内源性 CCDC134 ，再加入 PMA 和离子霉素刺激，结果显示封闭内源性 CCDC134 能活化 Elk1 通路，并且能活化 MEK1/2 、 ERK1/2 、 Elk1 和 JNK 的磷酸化水平，但并不影响 p38 MAPK 的磷酸化水平。

同时通过去除信号肽的截短体实验和 N 端测序鉴定 CCDC134 为一个分泌蛋白，经过 Ni 2+ 柱料纯化获得 CCDC134 蛋白，并将不同浓度蛋白加入细胞培养上清中，结果显示在 HEK293T 细胞中明显抑制乙酸肉豆蔻佛波醇 (PMA) 和离子霉素 (ionomyein) 刺激的 Elk1 通路，并且能影响 ERK 和 JNK/SAPK 信号通路，即抑制 MEK1/2 、 ERK1/2 、 Elk1 和 JNK 的磷酸化水平，但并不影响 p38 MAPK 的磷酸化水平。

四、合作意向

目前，本中心正在与国家人类基因组北方研究中心合作，进一步开展 CCDC134 的功能和分子作用机理的研究。本中心已经构建了 CCDC134 真核表达质粒、 GFP 细胞定位表达质粒、腺病毒表达克隆等，并获得了 CCDC134 的真核及原核表达蛋白。希望与基础研究实验室合作开展 CCDC134 在免疫系统的功能和应用研究。与临床实验室合作开展免疫系统疾病组织中 CCDC134 的表达水平检测。与药物研发单位企业合作开展 CCDC134 的工程药物开发研究。

联系人： 邱晓彦 教授， Tel:82802846-5035; Email: qiuxy@bjmu.edu.cn

石太平， Tel:67883332-868; Email: taiping_shi@yahoo.com.cn

参考文献：

1. Jing Huang, Taiping Shi, Teng Ma, Xi Ma, Yingmei Zhang, Quansheng Song, Yang Lu, Wei Liu, Dalong Ma, Xiaoyan Qiu. CCDC134, a novel secretory protein, inhibits activation of ERK and JNK, but not p38 MAPK. Cell Mol Life Sci, 2008, Accepted. 2008, 65 ( 2): 338-349

北京大学人类疾病基因研究中心
2008.04.28